cdna是什么意思?新近获批的三种新冠病毒核酸诊断试剂中包括全国首个多指标新冠病毒检测试剂盒,即“呼吸道病毒(6种)核酸检测试剂盒(恒温扩增芯片法)”,只需采集患者的鼻、咽试子等分泌物样本,一次可进行6种呼吸道病毒核酸检测,1.5小时内便可获取结果。这类快速联合检测试剂盒若能迅速应用到疫情防控前线,将为众多患者及一线医务人员提供快速、精准、有效诊断。
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新冠病毒核酸检测流程
第一步:临床标本(可疑患者、密切接触者、企业复工人员及疫情防控需要由政府部门指定的筛查人员等)的采集
经过生物安全培训 (培训合格) 和具备相应的实验技能的技术人员,在配备N95 及以上防护口罩、护目镜、连体防护服、双层乳胶手套(如果接触了患者血液、体液、分泌物或排泄物,应及时更换外层乳胶手套)、防水靴套等防护用具的前提下采集标本。其中,住院病例的标本由所在医院的医护人员采集;密切接触者标本由当地指定的疾控机构、医疗机构负责采集。
可采集的标本检材多样,标本种类包括:上呼吸道标本(包括咽拭子、鼻拭子、鼻咽抽取物等);下呼吸道标本(包括深咳痰液、呼吸道抽取物、支气管灌洗液、肺泡灌洗液、肺组织活检标本);血液标本(尽量釆集发病后 7 天内的急性期抗凝血);便标本(出现腹泻症状的患者需采集便标本)等等。临床最常推荐的采集标本的主要方法是咽拭子,当然也可以用深咳痰液。
第二步:标本的包装、转运
标本采集后在生物安全二级实验室生物安全柜内分装,所有标本应放在大小适合的带螺旋盖内有垫圈、耐冷冻的样本采集管里,拧紧;容器外注明样本编号、种类、姓名及采样日期。
用于病毒分离和核酸检测的标本应尽快进行检测,能在 24 小时内检测的标本可置于 4°C 保存;24 小时内无法检测的标本则应置于 -70°C 或以下保存(如无 -70°C 保存条件,则于 -20°C 冰箱暂存)。血清可在 4°C 存放 3 天,-20°C 以下可长期保存。应设立专库或专柜单独保存标本。
标本采集后,应尽快送往实验室,如果需要长途运输标本,应采用干冰等制冷方式进行保藏,标本运送期间避免反复冻融。
第三步:实验室检测
新冠病毒感染的常规检测方法是通过实时荧光RT-PCR进行鉴定。荧光RT-PCR全称是实时荧光反转录聚合酶链式反应。它首先将从标本中提取的病毒基因组RNA,通过反转录变成互补DNA(cDNA)。然后再用病原体特异性的引物,以cDNA作为模板扩增病原体核酸序列。因为扩增的过程中荧光染料能同步整合在产物上,所以研究者可以通过荧光信号的强弱,进行实时检测。此方法,最关键的步骤就是设计病原体特异性的引物。以新冠病毒核酸检测为例,了解到这种新病毒全基因组的核酸信息,才能获得与它的“近亲”病毒(如:SARS、MERS)不一样的基因序列,从而设计出特异性针对新冠病毒的引物,使这种方法诊断的准确性更高。
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新冠病毒核酸检测的“假阴性”
检测结果不仅与试剂盒质量有关,还与新冠病毒自身的特点、采样部位、采样量、运输和储存环节,以及实验室检测条件和人员操作有关,由多种原因构成,非常复杂。
1、样本质量差。不同的采样部位对检出率有很大影响,最好的采样部位是肺部,因为这种病毒分布在肺部的浓度最大,但要想采肺泡灌洗液,操作复杂,需要仪器和各种引管,且对人的损伤很大,因此只针对上了呼吸机的重症病人;其次是痰,但这次肺炎不像以往的甲流,很多病患干咳,无痰。因此,最普遍也最简单的采样方式是咽拭子,而咽部的新冠病毒量最少,所以会造成漏检。以咽拭子为例,虽然是很简单的操作,只需要在咽部拿一个棉签划一下,但每个医护人员划的轻重、多少都不相同。
2、样本收集的时机过早或过晚。
3、没有正确保存、运输和处理样本。除了采样,从样本运输到实验室检测的诸多环节中,每一个环节出错都可能造成检验结果的不准确。
4、技术本身存在的原因,如病毒变异、PCR抑制等。
目前,临床上确诊病例仍需有病原学证据阳性结果(实时荧光RT-PCR检测新型冠状病毒核酸阳性;或病毒基因测序,与已知的新型冠状病毒高度同源)。但在临床处置上,对于多次检测阴性,但是临床症状典型,参照肺部CT等诊断为临床确诊病例。